1.冷冻管应如何解冻？
取出冷冻管后，须立即放入37℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管的爆裂。
2.细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？
除少数特别注明对DMSO敏感的细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10~15 ml新鲜培养基的培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附的问题。
3.可否使用与原先培养条件不同的培养基？
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基，若骤然使用和原先提供培养条件不同的培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
4.可否使用与原先培养条件不同的血清种类？
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
5.何谓FBS，FCS，CS，HS？
FBS（fetal bovine serum）和FCS（fetal calf serum）是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS是错误的使用字眼，请不要再使用。CS（calf serum）则是指小牛血清。HS（则是指马血清。
6.培养细胞时应使用5%或10%CO2？或根本没有影响？
一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7 g时，细胞培养时应使用10%CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时，则应使用5%CO2培养细胞。
7.何时须更换培养基？培养基中是否须添加抗生素？
视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。
除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。
一℃16~18小时（或隔夜）→液氮槽vapor phase长期储存。
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