智立中特(武汉)生物科技有限公司主要致力于质粒微生物资源的保护、共享和持续利用,围绕我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展等重大需求,探索、发现、收集国内外的微生物资源,妥善长期保存管理;在保证生物安全和保护知识产权的前提下,为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供质粒载体物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。旗下质粒载体网是一款提供质粒载体展示及定制的专业型网站,由智立中特(武汉)生物科技有限公司联合多家企业公司科研院校共同打造!主要展示了各种基因类型下的质粒载体!
我们的工作主要包括:广泛分离、收集、保藏、交换和供应各类微生物质粒菌种;保存用于专利程序的各种可培养生物材料;质粒载体类保藏技术研究;微生物分离、培养技术研究;微生物鉴定和复核技术研究;保藏菌种的资料情报收集和提供及编辑微生物菌种目录。
目前保存各类载体资源超过20000余种,质粒微生物约5000株,另外我们还代理国外微生物菌种资源,如addgene,安捷伦,thermo,atcc等。
名称:293F(人胚肾细胞)
别称:HEK-293-F;HEK 293-F;HEK-293F;HEK293F;293-F;293 F;HEK293-F
种属:人
年龄(性别):胚胎
生长特性:贴壁细胞
细胞形态:上皮细胞样
生长培养基:DMEM)+10%FBS+1%P/S
推荐传代比例:1:3-1:4
推荐换液频率2~3次/周
冻存条件
冻存液:55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度:液氮
培养条件
气相:空气,95%;CO2,5%
温度:37℃
验收细胞注意事项
1、收到293F(人胚肾细胞),请查看瓶子是否有破裂,培养基是否漏出,是否浑浊,如有请尽快联系。
2、收到293F(人胚肾细胞),如包装完好,请在显微镜下观察细胞。,由于运输过程中的问题,细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来,显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况,出现此状态时,请不要打开细胞培养瓶,应立即将培养瓶置于细胞培养箱里静止3-5小时左右,让细胞先稳定下,再于显微镜下观察,此时多数细胞会重新贴附于瓶壁。如细胞仍不能贴壁,请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,如台盼蓝染色证实细胞活力正常请按悬浮细胞的方法处理。
3、收到293F(人胚肾细胞)后,请镜下观察细胞,用恰当方式处理细胞。若悬浮的细胞较多,请离心收集细胞,接种到一个新的培养瓶中。弃掉原液,使用新鲜配制的培养基,使用进口胎牛血清。刚接到细胞,若细胞不多时血清浓度可以加到15%去培养。若细胞迏到80%左右,血清浓度还是在10%。
4、收到293F(人胚肾细胞)时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养基吸出,留下5-10ML培养基继续培养:超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液,1000转/分钟离心3分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
5、将培养瓶置于37℃培养箱中培养,盖子微微拧松。吸出的培养基可以保存在灭菌过的瓶子里,存放于4℃冰箱,以备不时之需。
6、24小时后,293F(人胚肾细胞)已恢复并贴满瓶壁,即可传代。(贴壁细胞)将培养瓶里的培养基倒去,加3-5ml(以能覆盖细胞生长面为准)PBS或Hanks’液洗涤后弃去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化,消化时间以具体细胞为准,一般1-3分钟,不超过5分钟。可以放入37℃培养箱消化。轻轻晃动瓶壁,见细胞脱落下来,加入3-5ml培养基终止消化。用移液管轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后将溶液吸入离心管内离心,1000rpm/5min。弃上清,视细胞数量决定分瓶数,一般一传二,如细胞量多可一传三,有些细胞不易传得过稀,有些生长较快的细胞则可以多传几瓶,以具体细胞和经验为准。(悬浮细胞)用移液管轻轻吹打瓶壁,直接将溶液吸入离心管离心即可。
7、贴壁细胞,悬浮细胞。严格无菌操作。换液时,换新的细胞培养瓶和换新鲜的培养液,37℃,5%CO2培养。